cancerspЮжно-Российский онкологический журнал/ South Russian Journal of CancerSouth Russian Journal of Cancer2686-9039АНО "Перспективы онкологии"10.37748/2686-9039-2023-4-1-1ATEHFOcancersp-195Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESИммуногистохимическая оценка возможных механизмов противоопухолевого действия 2-(6,8-диметил-5-нитро-4-хлорхинолин-2-ил)-5,6,7-трихлор-1,3-трополона на PDX-моделях рака легкогоImmunohistochemical assessment of possible anticancer effect mechanisms of 2-(6,8-dimethyl-5-nitro-4-chloroquinoline-2-yl)- 5,6,7-trichloro-1,3-tropolone in PDX models of lung cancerhttps://orcid.org/0000-0002-7553-6550КомароваЕ. Ф.KomarovaE. F.

 

Комарова Екатерина Федоровна – д.б.н., профессор РАН, старший научный сотрудник, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация; заведующая кафедрой биомедицины (и психофизиологии), ФГБОУ ВО «РостГМУ» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7553-6550, SPIN: 1094-3139, AuthorID: 348709, ResearcherID: T-4520-2019, Scopus Author ID: 55890096600

 

Ekaterina F. Komarova – Dr. Sci. (Biol.), professor of the RAS, senior researcher, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation; head of the biomedicine department (and psychophysiology), Rostov State Medical University, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7553-6550, SPIN: 1094-3139, AuthorID: 348709, ResearcherID: T-4520-2019, Scopus Author ID: 55890096600

katitako@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-3036-6199ЛукбановаЕ. А.LukbanovaE. A.

 

Лукбанова Екатерина Алексеевна – научный сотрудник, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3036-6199, SPIN: 4078-4200, AuthorID: 837861

 

Ekaterina A. Lukbanova – junior researcher, National Medical Research Center of Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3036-6199, SPIN: 4078-4200, AuthorID: 837861

https://orcid.org/0000-0002-3561-098XДженковаЕ. А.DzhenkovaE. A.

 

Дженкова Елена Алексеевна – д.б.н., доцент, ученый секретарь, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3561-098X, SPIN: 6206-6222, AuthorID: 697354, ResearcherID: K-9622-2014, Scopus Author ID: 6507889745

 

Elena A. Dzhenkova – Dr. Sci. (Biol.), academic secretary, National Medical Research Centre, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3561-098X, SPIN: 6206-6222, AuthorID: 697354, ResearcherID: K-9622-2014, Scopus Author ID: 6507889745

https://orcid.org/0000-0003-0676-0871ГончароваА. С.GoncharovaA. S.

 

Гончарова Анна Сергеевна – к.б.н., заведующая испытательным лабораторным центром, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0676-0871, SPIN: 7512-2039, AuthorID: 553424, Scopus Author ID: 57215862139

 

Anna S. Goncharova – Cand. Sci. (Biol.), head of the testing laboratory center, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0676-0871, SPIN: 7512-2039, AuthorID: 553424, Scopus Author ID: 57215862139

https://orcid.org/0000-0003-0088-2990ЗаикинаЕ. В.ZaikinaE. V.

 

Заикина Екатерина Владиславовна – младший научный сотрудник испытательного лабораторного центра, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0088-2990, SPIN: 4000-4369, AuthorID: 1045258, Scopus Author ID: 57221463270

 

Ekaterina V. Zaikina – junior research fellow of the testing laboratory center, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-0088-2990, SPIN: 4000-4369, AuthorID: 1045258, Scopus Author ID: 57221463270

https://orcid.org/0000-0002-9747-8515ГуроваС. В.GurovaS. V.

 

Гурова Софья Валерьевна – младший научный сотрудник испытательного лабораторного центра, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9747-8515, SPIN: 5413-6901, AuthorID: 1147419

 

Sofya V. Gurova – junior research fellow of the testing laboratory center, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9747-8515, SPIN: 5413-6901, AuthorID: 1147419

https://orcid.org/0000-0001-7823-3865ГалинаА. В.GalinaA. V.

 

Галина Анастасия Владимировна – младший научный сотрудник испытательного лабораторного центра, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0001-7823-3865, SPIN: 9171-4476, AuthorID: 1071933

 

Anastasiya V. Galina – junior research fellow of the testing laboratory center, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0001-7823-3865, SPIN: 9171-4476, AuthorID: 1071933

https://orcid.org/0000-0003-3436-1325КурбановаЛ. К.KurbanovaL. K.

 

Курбанова Луиза Зулкаидовна – младший научный сотрудник испытательного лабораторного центра, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3436-1325, SPIN: 9060-4853, AuthorID: 1020533

 

Luiza Z. Kurbanova – junior research fellow of the testing laboratory center, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3436-1325, SPIN: 9060-4853, AuthorID: 1020533

https://orcid.org/0000-0001-8734-9210МиндарьМ. В.MindarM. V.

 

Миндарь Мария Вадимовна – младший научный сотрудник испытательного лабораторного центра, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8734-9210, SPIN: 5148-0830, AuthorID: 1032029, Scopus Author ID: 57217235360

 

Mariya V. Mindar – junior research fellow of the testing laboratory center, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8734-9210, SPIN: 5148-0830, AuthorID: 1032029, Scopus Author ID: 57217235360

https://orcid.org/0000-0003-3753-4463ХодаковаД. В.KhodakovaD. V.

 

Ходакова Дарья Владиславовна – младший научный сотрудник испытательного лабораторного центра, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3753-4463, SPIN: 8718-3983, AuthorID: 1056414

 

Darya V. Khodakova – junior research fellow of the testing laboratory center, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3753-4463, SPIN: 8718-3983, AuthorID: 1056414

https://orcid.org/0000-0002-9426-9662ГусареваМ. С.GusarevaM. S.

 

Гусарева Марина Александровна – к.м.н., заведующая отделением радиотерапии № 1, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9426-9662, SPIN: 9040-5476, AuthorID: 705242

 

Marina A. Gusareva – Cand. Sci. (Med.), head of the department of radiotherapy No. 1, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation

ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9426-9662, SPIN: 9040-5476, AuthorID: 705242

https://orcid.org/0000-0003-2460-0038ЗиньковичМ. С.ZinkovichM. S.

 

Зинькович Михаил Сергеевич – к.м.н., врач-радиотерапевт отделением радиотерапии № 1, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону, Российская Федерация.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-2460-0038, SPIN: 1072-9674, AuthorID: 735168

 

Mikhail S. Zinkovich – Cand. Sci. (Med.), radiotherapist, radiotherapy department No. 1, National Medical Research Centre for Oncology, Rostov-on-Don, Russian Federation.

ORCID: https://orcid.org/0000-0003-2460-0038, SPIN: 1072-9674, AuthorID: 735168

ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России; ФГБОУ ВО «РостГМУ» Минздрава РоссииРоссияNational Medical Research Centre for Oncology; Rostov State Medical UniversityRussian FederationФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава РоссииРоссияNational Medical Research Centre for OncologyRussian Federation20230102202341613Copyright © Комарова Е.Ф., Лукбанова Е.А., Дженкова Е.А., Гончарова А.С., Заикина Е.В., Гурова С.В., Галина А.В., Курбанова Л.К., Миндарь М.В., Ходакова Д.В., Гусарева М.С., Зинькович М.С., 20232023Комарова Е.Ф., Лукбанова Е.А., Дженкова Е.А., Гончарова А.С., Заикина Е.В., Гурова С.В., Галина А.В., Курбанова Л.К., Миндарь М.В., Ходакова Д.В., Гусарева М.С., Зинькович М.С.Komarova E.F., Lukbanova E.A., Dzhenkova E.A., Goncharova A.S., Zaikina E.V., Gurova S.V., Galina A.V., Kurbanova L.K., Mindar M.V., Khodakova D.V., Gusareva M.S., Zinkovich M.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.cancersp.com/jour/article/view/195Цель исследования

Цель исследования. Оценить уровень экспрессии иммуногистохимических опухолевых маркеров Ki-67, b-catenin, Bcl-2, P53, коннексина 32 и коннексина 43 при применении 2-(6,8-диметил-5-нитро-4-хлорхинолин-2-ил)-5,6,7-трихлор-1,3-трополона у мышей с ксенографтами плоскоклеточного рака легкого.

Материалы и методы

Материалы и методы. На иммунодефицитных мышах линии BALB/c Nude были получены подкожные PDX-модели плоскоклеточного рака легкого человека. Фрагмент опухоли пациента размером 3 × 3 × 3 мм имплантировали подкожно в область правого бедра мыши, предварительно наркотизировав животное при помощи ксилазина концентрацией 20 мг/мл и золетила (тилетамин, золазепам основание) концентрацией 22,57 мг/мл. Введение субстанции 2-(6,8-диметил-5-нитро-4-хлорхинолин-2-ил)-5,6,7-трихлор-1,3-трополон, производили перорально при помощи зонда в объеме 200 мкл в 12 приемов с кратностью 1 раз в 3 дня. Все животные были распределены по группам в зависимости от примененной дозы трополона: опытные группы № 2–5 в дозах 0,0055, 0,055, 0,55 и 2,75 мг/г соответственно. Контрольной группе животных вводили 1 % крахмальный гель, который являлся носителем для трополона. После 36 дней от начала введения субстанции животных эвтаназировали, выделяли опухолевую ткань, которую готовили к ИГХ исследованию по стандартному протоколу. Проводили ИГХ реакции с использованием антител для Ki-67, b-catenin, Bcl-2, P53, коннексина 32 и коннексина 43.

Результаты

Результаты. Было обнаружено, что с повышением дозы трополона уменьшается экспрессия Ki-67, b-catenin, а также происходит снижение уровня экспрессии белка Bcl-2. При этом уровень экспрессии белка P53 нарастает при увеличении дозы примененного вещества. При исследовании влияния трополона на уровень экспрессии коннексина 43 была обнаружена прямо пропорциональная зависимость его экспрессии при повышении дозы трополона.

Заключение

Заключение. Проведенный иммуногистохимический анализ уровня экспрессии белков в PDX-моделях плоскоклеточного рака легкого человека при применении 2-(6,8-диметил-5-нитро-4-хлорхинолин-2-ил)-5,6,7-трихлор-1,3-трополона обнаружил их изменения, указывающие на его противоопухолевую эффективность и позволяющие предполагать возможный механизм действия изученной субстанции за счет активации апоптоза.

Purpose of the study

Purpose of the study. Evaluation of the expression of immunohistochemical tumor markers Ki-67, b-catenin, Bcl-2, P53, connexin 32 and connexin 43 when using 2-(6,8-dimethyl-5-nitro-4-chloroquinoline-2-yl)-5,6,7-trichloro-1,3-tropolone in mice with xenographs of squamous cell lung cancer.

Materials and methods

Materials and methods. Subcutaneous PDX models of human squamous cell lung cancer were created in immunodeficient BALB/c Nude mice. A fragment of the patient’s tumor (3 × 3 × 3 mm) was implanted subcutaneously in the right thigh of a previously anesthetized mouse. 200 μl of 2-(6,8-dimethyl-5-nitro-4-chloroquinoline-2-yl)-5,6,7-trichloro-1,3-tropolone was administered orally using a probe in 12 doses once every 3 days. All animals were divided into groups depending on the tropolone doses: experimental groups 2–5 with doses of 0.0055, 0.055, 0.55 and 2.75 mg/g, respectively. The control group received 1 % starch gel which was tropolone carrier. The animals were euthanized 36 days after the start of the substance administration, and the tumor tissue was isolated and prepared for the IHC study according to the standard protocol. IHC reactions were performed using antibodies for Ki-67, b-catenin, Bcl-2, P53, connexin 32 and connexin 43.

Results

Results. Higher tropolone doses were associated with decreased expression of Ki-67, b-catenin, and the Bcl-2 protein, but increased expression of the P53 protein. The dosage of tropolone and expression of connexin 43 were directly proportional.

Conclusion

Conclusion. Immunohistochemical analysis of expression of proteins in PDX models of human squamous cell lung cancer when using 2-(6,8-dimethyl-5-nitro-4-chloroquinoline-2-yl)-5,6,7-trichloro-1,3-tropolone showed the changes indicating its antitumor efficacy and suggesting a possible mechanism of action based on the activation of apoptosis.

2-(68-диметил-5-нитро-4-хлорхинолин-2-ил)-567-трихлор-13-трополонплоскоклеточный рак легкогоPDXKi-67b-cateninBcl-2P53коннексин 32 и коннексин 43апоптоз2-(68-dimethyl-5-nitro-4-chloroquinoline-2-yl)-567-trichloro-13-tropolonesquamous cell lung cancerPDXKi-67b-cateninBcl-2P53connexin 32 and connexin 43apoptosisReferencesКит О. И., Шапошников А. В., Златник Е.Ю., Никипелова Е.А., Новикова И. А. Местный клеточный иммунитет при аденокарциноме и полипах толстой кишки. Сибирское медицинское обозрение. 2012;4(76):11–16. EDN: PBXSWFKit OI, Shaposhnikov AV, Zlatnik EY, Nikipelova EA, Novikova IA. Local cellular immunity in adenocarcinoma and large intes- tine polyps. Siberian Medical Review. 2012;4(76):11–16. (In Russ.). EDN: PBXSWFКит О. И., Франциянц Е. М., Никипелова Е. А., Комарова Е. Ф., Козлова Л. С., Таварян И. С., и др. Изменения маркеров пролиферации, неоангиогенеза и системы активации плазминогена в ткани рака прямой кишки. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2015;2(114):40–45. EDN: THKCLPKit OI, Frantsiyants EM, Nikipelova EA, Komarova EF, Kozlova LS, Tavaryan IS, et al. Changes in markers of proliferation, neoangiogenesis and plasminogen activation system in rectal cancer tissue. Experimental and Clinical Gastroenterology. 2015;2(114):40–45. (In Russ.). EDN: THKCLPBang DN, Sayapin YuA, Nguyen HL, Duc D, Komissarov VN. Synthesis and cytotoxic activity of [benzo[b][1,4]oxazepino[7,6,5-de]quinolin-2-yl]-1,3-tropolones. Chemistry of Heterocyclic Compounds. 2015;51(3):291–294. https://doi.org/10.1007/s10593-015-1697-2Bang DN, Sayapin YuA, Nguyen HL, Duc D, Komissarov VN. Synthesis and cytotoxic activity of [benzo[b][1,4]oxazepino[7,6,5-de] quinolin-2-yl]-1,3-tropolones. Chemistry of Heterocyclic Compounds. 2015;51(3):291–294.Tkachev VV, Shilov GV, Aldoshin SM, Sayapin YA, Tupaeva IO, Gusakov EA, et al. Structure of 2-(benzoxazole-2-yl)5,7-di(tert-butyl)-4-nitro-1,3-tropolone. Journal of Structural Chemistry. 2018;59(1):197–200. https://doi.org/10.1134/s0022476618010316https://doi.org/10.1007/s10593-015-1697-2Бурбаева Г. Ш., Андросова Л. В., Савушкина О. К. Связывание колхицина с тубули-ном в структурах головного мозга в норме и при шизофрении. Нейрохимия. 2020;37(2):183–187. https://doi.org/10.31857/s1027813320010069Tkachev VV, Shilov GV, Aldoshin SM, Sayapin YA, Tupaeva IO, Gusakov EA, et al. Structure of 2-(benzoxazole-2-yl)- 5,7- di(tert-butyl)-4-nitro-1,3-tropolone. Journal of Structural Chemistry. 2018;59(1):197–200. https://doi.org/10.1134/s0022476618010316Alkadi H, Khubeiz MJ, Jbeily R. Colchicine: A Review on Chemical Structure and Clinical Usage. Infect. Disord. Drug Targets. 2018;18(2):105–121. https://doi.org/10.2174/1871526517666171017114901Burbaeva GSh, Androsova LV, Savushkina OK. Binding of colchicine to tubulin in the brain structuresin normal conditions and in schizophrenia. Нейрохимия. 2020;37(2):183–187. (In Russ.). https://doi.org/10.31857/s1027813320010069 , EDN: UMXPLKFlorian S, Mitchison TJ. Anti-Microtubule Drugs. Methods Mol Biol. 2016;1413:403–421. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-3542-0_25Alkadi H, Khubeiz MJ, Jbeily R. Colchicine: A Review on Chemical Structure and Clinical Usage. Infect. Disord. Drug Targets. 2018;18(2):105–121. https://doi.org/10.2174/1871526517666171017114901Zhang G, He J, Ye X, Zhu J, Hu X, Minyan Sh, et al. β-Thujaplicin induces autophagic cell death, apoptosis, and cell cycle arrest through ROS-mediated Akt and p38/ERK MAPK signaling in human hepatocellular carcinoma. Cell Death Dis. 2019 Mar 15;10(4):255. doi: https://doi.org/10.1038/s41419-019-1492-6Florian S, Mitchison TJ. Anti-Microtubule Drugs. Methods Mol Biol. 2016;1413:403–421. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-3542-0_25Chen SM, Wang BY, Lee CH, Lee HT, Li JJ, Hong GC, et al. Hinokitiol up-regulates miR-494-3p to suppress BMI1 expression and inhibits self-renewal of breast cancer stem/progenitor cells. Oncotarget. 2017 Jun 27;8(44):76057–76068. https://doi.org/10.18632/oncotarget.18648Zhang G, He J, Ye X, Zhu J, Hu X, Minyan Sh, et al. β-Thujaplicin induces autophagic cell death, apoptosis, and cell cycle ar- rest through ROS-mediated Akt and p38/ERK MAPK signaling in human hepatocellular carcinoma. Cell Death Dis. 2019 Mar 15;10(4):255. doi: https://doi.org/10.1038/s41419-019-1492-6Haney SL, Allen C, Varney ML, Dykstra KM, Falcone ER, Colligan SH, et al. Novel tropolones induce the unfolded protein response pathway and apoptosis in multiple myeloma cells. Oncotarget. 2017 Jun 16;8(44):76085–76098. https://doi.org/10.18632/oncotarget.18543Chen SM, Wang BY, Lee CH, Lee HT, Li JJ, Hong GC, et al. Hinokitiol up-regulates miR-494-3p to suppress BMI1 expression and inhibits self-renewal of breast cancer stem/progenitor cells. Oncotarget. 2017 Jun 27;8(44):76057–76068. https://doi.org/10.18632/oncotarget.18648Лукбанова Е. А., Миндарь М. В., Дженкова Е. А., Максимов А. Ю., Гончарова А. С., Шатова Ю. С. и др. Экспериментальный подход к получению подкожного ксенографта немелкоклеточного рака легкого. Исследования и практика в медицине. 2022;9(2):65–76. https://doi.org/10.17709/2410-1893-2022-9-2-5, EDN: SWTKGUHaney SL, Allen C, Varney ML, Dykstra KM, Falcone ER, Colligan SH, et al. Novel tropolones induce the unfolded protein re- sponse pathway and apoptosis in multiple myeloma cells. Oncotarget. 2017 Jun 16;8(44):76085–76098. https://doi.org/10.18632/oncotarget.18543Колесников Е. Н., Лукбанова Е. А., Ванжа Л. В., Максимов А. Ю., Кит С. О., Гончарова А. С. и др. Способ проведения наркоза у мышей BALB/c Nude при оперативных вмешательствах. Патент RU № 2712916, опубл. 03.02.2020, Бюл. №4.Lukbanova EA, Mindar MV, Dzhenkova EA, Maksimov AYu, Goncharova AS, Shatova YuS, et al. Experimental approach to obtaining subcutaneous xenograft of non-small cell lung cancer. Research'n Practical Medicine Journal. 2022;9(2):65–76. (In Russ.). https://doi.org/10.17709/2410-1893-2022-9-2-5, EDN: SWTKGUМинкин В. И., Кит О. И., Гончарова А. С., Лукбанова Е. А., Саяпин Ю. А., Гусаков Е. А. и др. Средство, обладающее цитотоксической активностью в отношении культуры клеток немелкоклеточного рака легких А 549. Патент РФ. RU2741311 C1. Заявка № 2020123736 от 17.07.2020 г.Kolesnikov EN, Lukbanova EA, Vanzha LV, Maksimov AYu, Kit SO, Goncharova AS, et al. The method of anesthesia in BALB/c Nude mice during surgical interventions. Patent RU No. 2712916, publ. 03.02.2020, Bull. No 4. (In Russ.).Miller I, Min M, Yang C, Tian C, Gookin S, Carter D, et al. Ki67 is a Graded Rather than a Binary Marker of Proliferation versus Quiescence. Cell Rep. 2018 Jul 31;24(5):1105–1112.e5. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2018.06.110Minkin VI, Kit OI, Goncharova AS, Lukbanova EA, Sayapin YuA, Gusakov EA, et al. An agent with cytotoxic activity against a cell culture of non-small cell lung cancer A 549. Patent of the Russian Federation. RU2741311 C1. Application No. 2020123736 dated 07/17/20. (In Russ.).Albayrak G, Demirtas Korkmaz F. Memantine shifts cancer cell metabolism via AMPK1/2 mediated energetic switch in A549 lung cancer cells. EXCLI J. 2021 Feb 4;20:223–231.Miller I, Min M, Yang C, Tian C, Gookin S, Carter D, et al. Ki67 is a Graded Rather than a Binary Marker of Proliferation versus Quiescence. Cell Rep. 2018 Jul 31;24(5):1105–1112.e5. https://doi.org/10.1016/j.celrep.2018.06.110Gioacchini FM, Alicandri-Ciufelli M, Rubini C, Magliulo G, Re M. Prognostic value of Bcl-2 expression in squamous cell carcinoma of the larynx: a systematic review. Int J Biol Markers. 2015 May 26;30(2):e155–160. https://doi.org/10.5301/jbm.5000116Albayrak G, Demirtas Korkmaz F. Memantine shifts cancer cell metabolism via AMPK1/2 mediated energetic switch in A549 lung cancer cells. EXCLI J. 2021 Feb 4;20:223–231.Lee YS, Choi KM, Kim W, Jeon YS, Lee YM, Hong JT, et al. Hinokitiol inhibits cell growth through induction of S-phase arrest and apoptosis in human colon cancer cells and suppresses tumor growth in a mouse xenograft experiment. J Nat Prod. 2013 Dec 27;76(12):2195–2202. https://doi.org/10.1021/np4005135Gioacchini FM, Alicandri-Ciufelli M, Rubini C, Magliulo G, Re M. Prognostic value of Bcl-2 expression in squamous cell carci- noma of the larynx: a systematic review. Int J Biol Markers. 2015 May 26;30(2):e155–160. https://doi.org/10.5301/jbm.5000116Aasen T, Johnstone S, Vidal-Brime L, Lynn KS, Koval M. Connexins: Synthesis, Post-Translational Modifications, and Trafficking in Health and Disease. Int J Mol Sci. 2018 Apr 26;19(5):1296. https://doi.org/10.3390/ijms19051296Lee YS, Choi KM, Kim W, Jeon YS, Lee YM, Hong JT, et al. Hinokitiol inhibits cell growth through induction of S-phase arrest and apoptosis in human colon cancer cells and suppresses tumor growth in a mouse xenograft experiment. J Nat Prod. 2013 Dec 27;76(12):2195–2202. https://doi.org/10.1021/np4005135Ruch RJ. Connexin43 Suppresses Lung Cancer Stem Cells. Cancers (Basel). 2019 Feb 2;11(2):175. https://doi.org/10.3390/cancers11020175Aasen T, Johnstone S, Vidal-Brime L, Lynn KS, Koval M. Connexins: Synthesis, Post-Translational Modifications, and Traf- ficking in Health and Disease. Int J Mol Sci. 2018 Apr 26;19(5):1296. https://doi.org/10.3390/ijms19051296Spagnol G, Trease AJ, Zheng L, Gutierrez M, Basu I, Sarmiento C, et al. Connexin43 Carboxyl-Terminal Domain Directly Interacts with β-Catenin. Int J Mol Sci. 2018 May 24;19(6):1562. https://doi.org/10.3390/ijms19061562Ruch RJ. Connexin43 Suppresses Lung Cancer Stem Cells. Cancers (Basel). 2019 Feb 2;11(2):175. https://doi.org/10.3390/cancers11020175Aasen T, Mesnil M, Naus CC, Lampe PD, Laird DW. Gap junctions and cancer: communicating for 50 years. Nat Rev Cancer. 2016 Dec;16(12):775–788. https://doi.org/10.1038/nrc.2016.105. Erratum in: Nat Rev Cancer. 2017 Jan;17 (1):74.Spagnol G, Trease AJ, Zheng L, Gutierrez M, Basu I, Sarmiento C, et al. Connexin43 Carboxyl-Terminal Domain Directly In- teracts with β-Catenin. Int J Mol Sci. 2018 May 24;19(6):1562. https://doi.org/10.3390/ijms19061562Yang Y, Zhang N, Zhu J, Hong XT, Liu H, Ou YR, et al. Downregulated connexin32 promotes EMT through the Wnt/β-catenin pathway by targeting Snail expression in hepatocellular carcinoma. Int J Oncol. 2017 Jun;50(6):1977–1988. https://doi.org/10.3892/ijo.2017.3985Aasen T, Mesnil M, Naus CC, Lampe PD, Laird DW. Gap junctions and cancer: communicating for 50 years. Nat Rev Cancer. 2016 Dec;16(12):775–788. https://doi.org/10.1038/nrc.2016.105. Erratum in: Nat Rev Cancer. 2017 Jan;17 (1):74.Yang Y, Zhang N, Zhu J, Hong XT, Liu H, Ou YR, et al. Downregulated connexin32 promotes EMT through the Wnt/β-catenin pathway by targeting Snail expression in hepatocellular carcinoma. Int J Oncol. 2017 Jun;50(6):1977–1988. https://doi.org/10.3892/ijo.2017.3985Yang Y, Zhang N, Zhu J, Hong XT, Liu H, Ou YR, et al. Downregulated connexin32 promotes EMT through the Wnt/β-catenin pathway by targeting Snail expression in hepatocellular carcinoma. Int J Oncol. 2017 Jun;50(6):1977–1988. https://doi.org/10.3892/ijo.2017.3985

The authors declare that there are no conflicts of interest present.